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核酸分子关键原料:重组聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)
RPA不需特殊设备,常温即可扩增,且整个过程进行得非常快,一般可在十几分钟内获得检测结果,极大的缩减了检测时间,提高检测效率。2012年,Wahed[1] 等开发了一个能在3-7分钟内鉴定中东呼吸综合症冠状病毒(MERS-CoV)的便携式RT-RPA装置。 2014年,Kersting S等[2]利用RPA同时扩增和检测三种病原体:淋病奈瑟氏菌、沙门氏菌和MRSA,可以在20min以内完成三种病原体的检测。 Murinda SE等[3]在RPA的基础上首次建立了等温实时的产志贺毒素大肠埃希氏菌STEC检测体系,通过设计并评估了一系列引物和荧光探针,实现了很高的特异性和灵敏度。
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参考文献:
1)Wahed A A E, Patel P, Heidenreich D et al. Reverse Transcription Recombinase Polymerase Amplification Assay for the Detection of Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus, pLos Currents[J], 2013, 5:PMCID: PMC3871419.
2) Kersting, S., et al., Multiplex isothermal solid-phase recombinase polymerase amplification for the specific and fast DNA-based detection of three bacterial pathogens. Mikrochim Acta, 2014. 181(13-14): 1715-1723.
3)Murinda, S.E., et al., Real-time isothermal detection of Shiga toxin-producing Escherichia coli using recombinase polymerase amplification. Foodborne Pathog Dis, 2014. 11(7): 529-36.